使用方法:
(1)將材料板放在舞臺上。
(2)打開調(diào)節(jié)器熒光顯微鏡。然后按下并啟動UV燈,不能在近15分鐘內(nèi)點燃,收盤后不能重啟3分鐘。
(3)將激勵濾波器轉換為V,將分色器調(diào)整為V,選擇495或475nm阻塞濾波器。
(4)用uvfl40.uvfl100熒光鏡檢查。
(5)在載玻片上加入非熒光油,先用40X,再用100X聚焦顯微鏡檢測熒光。
(7)由于紫外線熒光隨著時間的推移而增加,照射熒光物質(zhì)逐漸減弱,視野檢查應不斷變化。
(8)紫外FL10或紫外FL20也可用作低倍顯微鏡材料(使用低倍顯微鏡時不添加熒光油)。
熒光圖像的記錄方法:
熒光顯微鏡觀察到的熒光圖像具有形態(tài)特征、熒光顏色和亮度。判斷結果時,必須結合判斷。結果是根據(jù)主觀指標記錄的,即工人的眼睛。作為一般的定性觀察,基本上是。隨著科學技術的發(fā)展,客觀指標被用來記錄判斷結果,如使用細胞分光光度計、圖像分析儀等儀器。然而,這些文件記錄的結果也必須與主觀判斷相結合。
熒光顯微鏡攝影是記錄熒光圖像的必要條件。由于熒光容易褪色和減弱,有必要記錄實時攝影的結果。該方法與普通顯微攝影方法基本相同。只需使用高速光敏膜,如ASA200或以上或24。以上。由于紫外線對熒光的猝滅效果很大,如熒光標記物FITC,當紫外線照射30s時,熒光亮度降低50%,因此曝光速度太慢,無法捕捉熒光圖像。一般來說,熒光顯微鏡有半自動或全自動顯微攝影系統(tǒng)
注:
(1)熒光顯微鏡嚴格按照操作說明書要求制作,不改變程序。
(2)檢查應在暗室進行。進入暗室后,打開電源,點燃超高壓汞燈5-15分鐘。當光源發(fā)出強光并穩(wěn)定下來時,眼睛有效地適應暗室,然后開始觀察標本。
(3)調(diào)節(jié)光源時戴防護眼鏡,防止紫外線損傷眼睛。
(4)每次檢查時間為1~2小時,超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸降低,熒光降低;紫外線照射3~5分鐘后熒光降低。因此,不超過2~3小時。
(5)熒光光學顯微鏡使用壽命有限,檢查應集中在樣品上,以節(jié)省時間,保護光源。天氣熱的時候要加冷卻風扇,換燈泡的時候要開始新的記錄時間。后燈可以點亮,然后熄滅,燈完全冷卻。一天幾次,避免火源。
(6)染色后,熒光會隨著時間的推移而逐漸減弱。當樣品在4℃下儲存在聚乙烯塑料袋中時,可以延遲熒光衰減時間,防止密封劑蒸發(fā)。
(7)熒光亮度的確定標準:一般分為“1”-NO或可見弱熒光四個層次?!?+”-只能看到明顯的熒光?!?+)+”-可見明亮。