使用方法:
(1)將物料板放在舞臺(tái)上。
(2)打開調(diào)節(jié)器熒光顯微鏡。然后按下啟動(dòng)一套UV燈不能在15分鐘內(nèi)點(diǎn)燃,然后收盤不能重新啟動(dòng)3分鐘。
(3)將激勵(lì)濾波器轉(zhuǎn)換為V,將分色器調(diào)整為V,選擇495或475nm阻塞濾波器。
(4)uvfl40.uvfl100熒光鏡檢查。
(5)在載玻片上加入非熒光油,先用40X,再用100X聚焦顯微鏡檢測(cè)熒光。
(7)視野檢查應(yīng)不斷變化,因?yàn)殡S著時(shí)間的推移,照射熒光物質(zhì)逐漸減弱。
(8)紫外FL10或紫外FL20也可用作低倍顯微鏡材料(使用低倍顯微鏡時(shí)不加熒光油)。
記錄熒光圖像的方法:
熒光顯微鏡觀察到的熒光圖像具有形態(tài)特征、熒光顏色和亮度。在判斷結(jié)果時(shí),必須將判斷結(jié)合起來。結(jié)果是基于主觀指標(biāo),即工人的眼睛。作為一般的定性觀察,它基本上是。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,使用細(xì)胞分光光度計(jì)、圖像分析儀等儀器等客觀指標(biāo)來記錄判斷結(jié)果。然而,這些文件中記錄的結(jié)果也必須與主觀判斷相結(jié)合。
熒光顯微鏡攝影對(duì)于記錄熒光圖像是非常必要的。由于熒光容易褪色和減弱,因此有必要記錄實(shí)時(shí)攝影的結(jié)果。這種方法與普通顯微鏡攝影方法基本相同。只需使用高速光敏膜,如ASA200或以上或24。在上面。由于紫外線對(duì)熒光的突然影響很大,如熒光標(biāo)志FITC,當(dāng)紫外線照射30秒時(shí),熒光亮度降低50%,因此曝光速度太慢,無法捕獲熒光圖像。一般來說,熒光顯微鏡具有半自動(dòng)或全自動(dòng)顯微攝影系統(tǒng)
注意事項(xiàng):
(1)熒光顯微鏡是嚴(yán)格按照操作說明書的要求制造的,不改變程序。
(2)檢查應(yīng)在暗室進(jìn)行。進(jìn)入暗室后,打開電源,點(diǎn)燃超高壓汞燈5-15分鐘。當(dāng)光源發(fā)出強(qiáng)光并穩(wěn)定時(shí),眼睛能有效適應(yīng)暗室,然后開始觀察標(biāo)本。
(3)為防止紫外線對(duì)眼睛造成傷害,在調(diào)節(jié)光源時(shí)佩戴防護(hù)眼鏡。
(4)每次檢查時(shí)間為1~2h,超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸降低,熒光降低;紫外線照射3~5分鐘后,熒光降低。因此,不超過2~3h。
(5)熒光光學(xué)顯微鏡使用壽命有限,檢查應(yīng)集中在樣品上,以節(jié)省時(shí)間,保護(hù)光源。天氣炎熱時(shí),應(yīng)增加冷卻風(fēng)扇,應(yīng)開始新的記錄時(shí)間來更換燈泡。后燈可以點(diǎn)亮,然后熄滅。燈完全冷卻。每天幾次,避免火源。
(6)染色后,熒光會(huì)隨著時(shí)間,熒光會(huì)逐漸減弱。當(dāng)樣品儲(chǔ)存在4℃的聚乙烯塑料袋中時(shí),可以延緩熒光衰減,防止密封劑蒸發(fā)。
(7)確定熒光亮度的標(biāo)準(zhǔn):一般分為四個(gè)層次,即“1”-NO或可見弱熒光?!?+-只能看到明顯可見的熒光。