微生物高倍顯微鏡的標(biāo)本采集必須經(jīng)過一定的提前準(zhǔn)備全過程,才能在顯微鏡下產(chǎn)生清晰的圖像。在出口照明燈和散射照明燈中,標(biāo)本采集的電子光學(xué)規(guī)定有很大的區(qū)別。出口照明燈具的誹謗是由標(biāo)本采集的折射光產(chǎn)生的;相反,在進(jìn)口照明燈具中,保護(hù)是由散射光產(chǎn)生的。在這種情況下,折射光不僅不利于圖像的產(chǎn)生,而且會降低圖像的圖像質(zhì)量。
對于入射角觀察的標(biāo)本采集,其準(zhǔn)備工作非常簡單,只是將標(biāo)本采集的表面清理干凈,用激光將其切割成一小塊,尺寸適中。用散射光觀察的標(biāo)本采集必須有一定的吸光差距,才能在顯微鏡下觀察。因此,標(biāo)本采集必須經(jīng)歷一系列復(fù)雜的解決方案和整個制作過程,這種制作技術(shù)是普遍的
常說生物顯微鏡技術(shù)。
從電子光學(xué)的角度來看,采集散射光觀察光學(xué)顯微鏡樣本有以下規(guī)定:
(1)適度薄厚。這種薄厚度在良好的光學(xué)電子系統(tǒng)中可以達(dá)到盡可能高的分辨率,并且與該系統(tǒng)軟件的場探相一致。
(2)清晰度充足。
(3)在消化吸收差異上創(chuàng)造足夠的差距。
事實上,所有的分子生物原料都是按照石措包埋、切片(或玻璃片)、粘貼、溶解蠟、完全透明等全過程,在厚度和清晰度上符合規(guī)定的標(biāo)本可以收集,然后根據(jù)著色過程得到一定的差距。
分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)組織切片一般用于散射生物顯微鏡,其厚度一般為3-7-7μm。在這一薄厚范疇中,應(yīng)使用高倍物鏡(例如10×)觀察時,場地深度全部切成薄片,厚度完全充足;應(yīng)用高信物鏡(如100×)觀察時,場深只是這片薄片厚度的一小部分(圖16.8),不斷從上到下移動,細(xì)調(diào)可以得到切片的整體印象。因而,5—7μm厚的基本切片可以感覺到是在低變大倍率和高變大倍率的理想化狀態(tài)之間的調(diào)合,兩者都很好的考慮到了到來的深度和分辨率。此外,由于各種原因,這種混合的厚度也考慮了具體工作的許多規(guī)定。第一個物體的微小結(jié)構(gòu)并不總是第一個;其次是太薄(1-2μm)微生物標(biāo)本采集中的立體關(guān)聯(lián)在切片中是看不到的;此外,當(dāng)應(yīng)用8-10時μm或者在切割較厚的薄片時,除了在分辨率上可以發(fā)現(xiàn)的損傷外,還會導(dǎo)致微生物標(biāo)本采集中不同層次的重合。
固定、埋、切片、溶解蠟、完全透明等解決后,動植物原料標(biāo)本采集足夠薄、完全透明,但差距不大,這種差距的關(guān)鍵來自映射和透射。顯然,這種標(biāo)本采集的差距遠(yuǎn)遠(yuǎn)不理想。然而,這可以根據(jù)減少映射的實際效果來覆蓋它“消化吸收化學(xué)物質(zhì)”并根據(jù)消化吸收的差異擴(kuò)大差距。標(biāo)本采集與周圍區(qū)域之間的映射可以根據(jù)澳大利亞樹木或其他人工密封材料中標(biāo)本采集和密封的方式減少。在所有這些密封材料蒸發(fā)或聚集硬化后,其折射率接近固定或干燥動物和植物機(jī)構(gòu)的主要成分。在大多數(shù)動植物機(jī)構(gòu)中,這個標(biāo)記值為1.5l1.54。另外,這種方法還可以去除蓋玻片下反射面引起的閃光。
它已經(jīng)在新世紀(jì)中使用了一個多世紀(jì),最有效的方法是給生物顯微鏡標(biāo)本產(chǎn)生良好的差距。一般來說,沒有顏色的微生物標(biāo)本的收集,特別是當(dāng)放置在類似于微生物標(biāo)本收集的折射率距。在著色標(biāo)本采集中,圖像差距的擴(kuò)大是基于染料的選擇性。著色和未著色標(biāo)本采集之間存在很大差異。
微生物切片通常粘在26×76mm標(biāo)準(zhǔn)尺寸和1.1—1.在3毫米厚的切割件上,切割件的雙面應(yīng)為平行平面圖。關(guān)于厚部件厚度的規(guī)定不是很嚴(yán)格,但當(dāng)其厚度超過一些高度修正水平集光器的自由工作間距時,對于聚焦點(diǎn)光源及其在物體平面圖上產(chǎn)生愿望光源圖像越來越重要。對于這種情況,厚度為0.9—1.0Mm裁裝片比較合適。關(guān)于蓋玻片的第三章已經(jīng)說過了,這里已經(jīng)不再重復(fù)了。