就像一百年前一樣，光學(xué)顯微鏡對(duì)病理學(xué)家來(lái)說(shuō)仍然非常重要。令人驚訝的是，光學(xué)顯微鏡的功能和用途在過(guò)去的一百年里幾乎沒(méi)有改變。選擇合適的儀器對(duì)于獲得高質(zhì)量的細(xì)胞圖像、方便舒適的使用和顯微鏡的功能維護(hù)非常重要。

　　檢驗(yàn)人員應(yīng)具備兩項(xiàng)基本知識(shí)：

　　①如何設(shè)置顯微鏡參數(shù)以獲得最佳圖像。

　?、谠鯓颖３衷O(shè)備的良好狀態(tài)。

　　本文旨在介紹如何選擇顯微鏡類(lèi)型、顯微鏡檢查的具體內(nèi)容以及日常使用和維護(hù)方法的實(shí)用指南。

　　本文所有內(nèi)容均為立式或復(fù)合顯微鏡。還有其他類(lèi)型的顯微鏡，如解剖顯微鏡或手術(shù)顯微鏡，這里討論的大部分信息也適用于這些顯微鏡;然而，這里并沒(méi)有討論一些特定的技術(shù)差異。本文將重點(diǎn)介紹用于檢查載玻片上染色標(biāo)本的亮視技術(shù)。

　　第一章

　　選擇顯微鏡

　　購(gòu)買(mǎi)顯微鏡與購(gòu)買(mǎi)任何大型商品(電視甚至汽車(chē))沒(méi)有太大區(qū)別。雖然型號(hào)不同，但最好從能提供完整信息、最了解商品、全面售后支持的供應(yīng)商那里購(gòu)買(mǎi)。購(gòu)買(mǎi)顯微鏡時(shí)應(yīng)注意的層次包括:

　　供應(yīng)商是否為顯微鏡提供安裝和培訓(xùn)服務(wù)?

　　保修期限及等級(jí)

　　售后支持：廠家是否有能給予幫助的人員，或者是能打電話(huà)或者提供上門(mén)服務(wù)的區(qū)域代表?

　　第二章

　　顯微鏡部件

　　照片

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　　顯微鏡頭

　　有四種類(lèi)型的顯微鏡頭：?jiǎn)瓮材跨R、雙筒目鏡、三目和人體工程改造。

　　單眼顯微鏡成本很低，不適合長(zhǎng)期使用。因此，雙眼顯微鏡是實(shí)驗(yàn)室或診療機(jī)構(gòu)的最低要求。如果需要在顯微鏡上添加攝像頭，則需要三眼鏡筒。人體工程學(xué)的目鏡可以根據(jù)不同用戶(hù)的身高調(diào)節(jié)鏡頭，從而獲得最舒適、最安全的角度，增加顯微鏡的使用時(shí)間。

　　注意:光圈是指在光學(xué)系統(tǒng)中限制光束的實(shí)體。它可以是鏡頭的邊緣、框架或特殊設(shè)置的帶孔屏幕。它的功能可以分為兩個(gè)方面:限制光束或限制視場(chǎng)(顯像范圍)的大小。光學(xué)系統(tǒng)中限制光束最多的光圈稱(chēng)為孔徑光圈，限制視場(chǎng)(大小)最多的光圈稱(chēng)為視場(chǎng)光圈。

　　2

　　顯微鏡支架

　　顯微鏡支架一般具有同軸粗調(diào)和細(xì)調(diào)的聚焦螺旋結(jié)構(gòu)。照明系統(tǒng)可以安裝在支架內(nèi)或顯微鏡背面的燈箱中。更復(fù)雜的支架一般設(shè)計(jì)在臨床上的特殊用途，具有低位載物平臺(tái)和聚焦控制系統(tǒng)，以減少手部和手腕的疲勞。一些支架還配備了高度可調(diào)節(jié)聚焦的安全鎖，可以防止載玻片撞擊物鏡，從而避免損壞標(biāo)本或損壞物鏡。

　　有兩種機(jī)械版本的顯微鏡支架，不同的部件安裝方式。根據(jù)其照明類(lèi)型，可分為：

　　柯勒(Koehler)照明顯微鏡

　　這種臨床/研究級(jí)顯微鏡可以對(duì)樣品產(chǎn)生極其均勻的照明，在生成的圖像中不會(huì)顯示燈源(如鹵素?zé)艚z或LED燈)。

　　臨界照明顯微鏡

　　這一成本較低的顯微鏡照明依賴(lài)于磨砂玻璃柔光鏡。其主要問(wèn)題是照明的均勻性不夠，圖像中可以看到燈源。

　　3

　　目鏡

　　顯微鏡總是配備一對(duì)10倍目鏡(其他放大倍數(shù)很少提供，比如15倍)。放大倍數(shù)保存在每個(gè)目鏡上。這些名稱(chēng)可能如下所示:

　　10×/20

　　WF10/22(widefield寬場(chǎng))

　　WF10×/22

　　放大倍數(shù)(例如10例)×)未來(lái)的數(shù)字(如/20、22)表示視場(chǎng)數(shù)，表示物鏡可以觀察到的視野大小(單位為mm)。視野越大，樣本面積越大。

　　不建議購(gòu)買(mǎi)視場(chǎng)數(shù)量少于20㎜顯微鏡;理想前提下，視場(chǎng)數(shù)22㎜下視野可以充分舒適地觀察樣本。一些眼鏡也可以顯示含有眼鏡的圖像，這表明它們是高點(diǎn)眼鏡，這樣戴眼鏡的時(shí)候可以看得很舒服。此外，一些眼鏡還插入了測(cè)量刻度(眼鏡刻度、十字線(xiàn)或刻度線(xiàn))。

　　4

　　物鏡

　　物鏡有幾種不同的類(lèi)型和特殊的組合。按特性主要分為：

　　色差鏡片：常規(guī)質(zhì)量

　　螢石鏡片：研究/臨床級(jí)別

　　重新消色差鏡片：質(zhì)量和分辨率最高

　　物鏡的質(zhì)量取決于偏色校準(zhǔn)的程度、球面像差和數(shù)值孔徑的差異。了解物鏡顯示的規(guī)格對(duì)于保證鏡頭的標(biāo)準(zhǔn)化使用非常重要。

　　下面將討論物鏡的關(guān)鍵因素和鏡筒技術(shù)指標(biāo)的識(shí)別。

　　便宜的顯微鏡不能提供平整的視線(xiàn)圖像。換句話(huà)說(shuō)，這個(gè)圖像的視野界限可能看起來(lái)有點(diǎn)模糊。能夠保證平場(chǎng)視野的鏡子應(yīng)該標(biāo)記plan。、或者planoPL。

　　放大倍數(shù)

　　物鏡的放大倍數(shù)乘以目鏡的放大倍數(shù)(通常是10倍)，也就是眼睛看到的放大倍數(shù)。40倍物鏡和10倍物鏡放大400倍。生物顯微鏡中最常用的物鏡倍數(shù)是4×、10×、20×、40×/50×和100×。

　　數(shù)值孔徑

　　這一術(shù)語(yǔ)指的是物鏡的分辨率。它代表了在固定距離內(nèi)收集光源和分析標(biāo)本細(xì)節(jié)的能力。

　　優(yōu)質(zhì)物鏡有更大的數(shù)值孔徑(按順序:消色差-螢石-復(fù)消色差)，可以提供更好的圖像分辨率。如果數(shù)值孔徑達(dá)到1或更高，物鏡必須浸沒(méi)物鏡(油鏡)。

　　長(zhǎng)度

　　低質(zhì)量和舊顯微鏡的固定長(zhǎng)度一般為160。㎜?，F(xiàn)代顯微鏡可以隨意校準(zhǔn)長(zhǎng)度，與質(zhì)量無(wú)關(guān);配件(如雙觀察管)會(huì)插入鏡體和用戶(hù)頭部之間，圖像的放大倍數(shù)不會(huì)改變到眼睛。

　　但是，在同一個(gè)顯微鏡上使用固定長(zhǎng)度的物鏡和隨意矯正的物鏡會(huì)導(dǎo)致圖像質(zhì)量差，并且有損壞物鏡的危險(xiǎn)。

　　蓋玻片校準(zhǔn)

　　大部分放大倍數(shù)20倍以上的干試鏡都是為了觀察含有蓋玻片的樣品而設(shè)計(jì)的，蓋玻片起到了鏡片的作用。因此，如果蓋玻片位置不正確，圖像質(zhì)量可能會(huì)很差。

　　標(biāo)準(zhǔn)蓋玻片厚度為0.17㎜。

　　為了獲得最高的數(shù)值孔徑和分辨率，需要在物鏡和標(biāo)本之間進(jìn)行油浸。如果物鏡用于油浸，放大倍數(shù)/數(shù)值孔徑后，在物鏡的鏡筒上寫(xiě)下“Oil”一詞(例如Plan1000×/1.25Oil)。

　　選擇優(yōu)質(zhì)油是必不可少的，這決定了圖像的質(zhì)量。避免混合不同的油，否則可能會(huì)發(fā)生反應(yīng)，提高油的濁度。此外，還應(yīng)避免長(zhǎng)期使用、低成本或特別粘稠的黃油。

　　假如干物鏡(例如40×)如果被油污染，可以用溫和的溶劑(如30%酒精)或市場(chǎng)上銷(xiāo)售的鏡頭清潔液擦拭。

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　　聚光鏡

　　為了達(dá)到物鏡的最佳分辨率，聚光鏡及其光圈以正確的強(qiáng)度和視角提供錐形光源。不同類(lèi)型的聚光鏡具有不同的校準(zhǔn)度和數(shù)值孔徑。

　　最為常見(jiàn)的聚光鏡有：

　　阿貝(Abbe)聚光鏡

　　這種聚光鏡可以在沒(méi)有光學(xué)校準(zhǔn)的情況下集中和控制進(jìn)入物鏡前的光線(xiàn)。這種聚光鏡有兩種控件，一種可以使其靠近或遠(yuǎn)離載物平臺(tái)，另一種可變光圈用于控制光束的直徑。這些控件可以用來(lái)調(diào)節(jié)亮度、照明勻稱(chēng)度和對(duì)比度。

　　大多數(shù)明視鏡都適合阿貝聚光鏡，但是使用高倍物鏡時(shí)有局限性。

　　聚光鏡，消色差和消球差。

　　消球差聚光鏡可以校準(zhǔn)集中光束的球面像差，消色差聚光鏡可以校準(zhǔn)偏色。這種聚光鏡有利于獲得最佳分辨率和最高數(shù)值孔徑。

　　0.9阿貝聚光鏡已經(jīng)能夠滿(mǎn)足常規(guī)臨床顯微鏡的需求，也是普通顯微鏡的必備條件。更先進(jìn)的帶螢石鏡的顯微鏡一般都配有校正度更高的聚光鏡。