熒光顯微鏡用于研究化學(xué)物質(zhì)在細(xì)胞中的吸收、運(yùn)輸、分布和定位。被測(cè)物體產(chǎn)生英國(guó)光有兩種形式:自發(fā)光。紫外線照射后直接發(fā)出的英國(guó)光稱為二次英國(guó)光。經(jīng)過(guò)熒光染料處理和紫外線照射后,可以發(fā)出英國(guó)光。細(xì)胞中的一些物質(zhì),如葉綠素,在紫外線照射后會(huì)產(chǎn)生自發(fā)光。雖然其他物質(zhì)本身沒(méi)有英國(guó)光,但它們可以通過(guò)熒光染料或英國(guó)光抗體染色發(fā)出二次英國(guó)光。
熒光顯微鏡選擇發(fā)光效率高的點(diǎn)光源,發(fā)射一定波長(zhǎng)的光(紫外線365nm或紫藍(lán)光420nm)作為一種激發(fā)光,它會(huì)激發(fā)標(biāo)本中的熒光物質(zhì),發(fā)出各種顏色的半透明光,然后通過(guò)物鏡和目鏡的放大來(lái)觀察。在如此強(qiáng)烈的對(duì)比環(huán)境中,即使半透明光很弱,也很容易識(shí)別,并且具有很高的靈敏度。它主要用于研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能和化學(xué)成分。
熒光顯微鏡可分為散射顯微鏡和下降顯微鏡兩種類型。前者是原始的,后者是先進(jìn)的。兩種熒光顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)相似,主要區(qū)別如下:散射激發(fā)光通過(guò)標(biāo)本,整個(gè)標(biāo)本產(chǎn)生光,然后進(jìn)入物鏡,放大率越大,光越弱;入射激發(fā)光投射到樣品表面,樣品表面產(chǎn)生光,然后光進(jìn)入物鏡。放大率越大,光線越高,適合高倍數(shù)觀察。
熒光顯微鏡的主要部件包括汞燈源、興奮過(guò)濾器、分色鏡(脫落)、抑制過(guò)濾器、暗場(chǎng)聚光燈(散射)等。此外,由于汞燈的嚴(yán)重加熱,其中大多數(shù)都配備了吸熱過(guò)濾器。一些熒光顯微鏡也有相位差鏡和環(huán)狀闌尾,因此可以觀察到相位差。熒光顯微鏡選擇倒置框架、倒置顯微鏡等。
此外,上述所有顯微鏡有顯微鏡CCD組裝成數(shù)字顯微鏡,將顯微鏡看到的物理圖像轉(zhuǎn)換成數(shù)字圖像,并在計(jì)算機(jī)上顯示圖像。因此,我們可以通過(guò)傳統(tǒng)的雙眼觀察和顯示屏上的再現(xiàn)來(lái)研究微領(lǐng)域,從而提高工作效率。